欢迎光临,本公司主营工作台 通风柜 风淋室 采样车 层流罩 传递窗 气瓶柜 调节阀等
手机网站 | 联系我们:15011148757 | 加入收藏
  • 公司动态

    动物组织细胞实验室的设计方案

    2016-03-29 18:15:49

     一、实验室环境要求
        根据动物组织细胞培养技术整个操作流程,以及培养技术的环境要求,根据实验室的等级划分可划分为p1p2p3p4几个等级,其中p4实验室等级*高要求也非常高,根据我们设计的要求,我们设计实验室等级达到p2等级即可。
        实验室环境要求:细胞培养是一种无菌操作技术,要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响,要求工作环境清洁、空气清新,干燥和无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧,常规操作和封闭培养于一室,为p2级洁净环境的洁净室。而洗刷消毒工作设在洁净室外,避免物品污染洁净室内环境。细胞洁净室需要一个空调系统并对外界保持一定的正压。
    • 实验室的设备
    1、超净工作台/生物安全柜
    细胞培养需要无菌要求高的环境,在进行操作细胞的实验时,需要在100级的空气下进行,那我们就需要购买能提供百级洁净度的超净工作台或生物安全柜了。
    对本实验来说,超净工作台已经可以完全满足实验员的操作需要。至于超净台的尺寸,购买双面单人以及单面双人
    2、  二氧化碳培养箱
    通常来说,细胞培养所用的缓冲体系是碳酸氢钠+HEPES体系,所以需要二氧化碳提供缓冲能力维持pH。这时我们就需要一个二氧化碳培养箱来对细胞进行培养。并且由于二氧化碳培养箱通常不具有制冷压缩机,所以需要用户确定其细胞房内在夏天也有全天候的空调制冷,否则会造成箱内温度超标。二氧化碳培养箱也分为气套式和水套式,水套式二氧化碳培养箱利用浸泡在水中的电热丝加热包裹在箱体内胆外的水套来达到控温的效果,其升温慢但是保温的效果良好,即使短时间发生断电也不怕影响箱体内的细胞生长,选择水套式培养箱。
    3、  倒置显微镜和电脑
    细胞培养的器皿厚度较大,传统的正置显微镜焦场不够,所以无法观察到贴在培养器皿底部的细胞,这时我们则需要倒置显微镜的帮助。对于一些荧光免疫细胞实验(IF),则还需要购买倒置的荧光显微镜。同时为了能够更好的获得细胞的信息安装一台电脑,对于我们的实验有很大的帮助,因此还需一台电脑与显微镜进行连接。
    4、  纯水机/超纯水机
    细胞培养还需要超纯水系统,普通的纯水和蒸馏水是无法用于细胞培养的,而超纯水主要用于配置一些培养基和试剂,超纯水的进水可为自来水,细胞培养用水除了超纯以外,*主要对内毒素有严格的要求,所以Thermo Scientific Barnstead纯水机水质稳定有保证,耗材寿命长,运程成本低廉纯水效果好。
    5、  离心机
    细胞培养需要离心收集传代细胞,一般转速在1000转到1500转之间,所以需要购买低转速的常温离心机,而且要带10ml50ml及培养板的转子。另外还需要一台高速冷冻离心机用于收集细胞沉淀或细胞上清。
    6、  液氮罐
    培养哺乳动物细胞肯定会建立一个细胞库,这样液氮罐就是必须的,放入液氮罐内的冻存细胞一般可以保证在近十年的时间内都具有生物活性,至于需要多大的液氮罐要根据细胞库的大小而定。
    7、  低温冰箱
    细胞在冻存时需要存放-70-80度过夜再放入液氮罐,这样则需要一个低温冰箱。
    三洋等低温冰箱。
    8、  传递窗
    细胞房在构建时要与外界隔绝,这样就需要购买传递窗来传递物品,减少污染的几率,并且将所有进入细胞室的物品都在传递窗内进行紫外杀菌,可以保证洁净室的安全。
    9、  高压灭菌锅
    各类细胞实验室器皿在使用前后都需要做灭菌处理,灭菌条件一般为121℃,20~30分钟,这样就需要一台放置在洁净室外的高压灭菌锅来保障生物安全性。
    10、 移液枪,电动移液枪
    细胞实验操作时,需要使用各种吸头及移液管,所以配置移液枪是必要的。
    11、细胞培养中需要的各种耗材
    各类细胞培养板,细胞培养瓶,平皿移液管等。
    12恒温水浴
    从液氮或超低温冰箱中取出细胞冻存管需要立即放于37℃水浴中快速复苏之后才传代培养,因此,恒温水浴也是细胞实验室必备仪器。
    1. 水槽
    实验室中有时紧急情况下需要临时用水,或者需要临时做基本的清洗时可以直接方便地在实验室里做简单处理。
    1. 细胞计数器
    细胞计数器用于大致的检测细胞的个数,方便快捷。
    1. 其余一些可能用到的仪器
    对于细胞实验还可能需要振荡器及磁力搅拌器用于混匀液体;酸缸用于器皿的消毒除去一些残留的杂质;天平和pH计等,还有一些沾满细胞的难清洗的不锈钢类或玻璃类器皿,则需要超声波清洗机的帮助;另外破碎细胞可能会需要超声波细胞破碎仪
    • 实验室的规划布局
    1.实验室设置
    1)准备室1
    • 酸缸:盛洗液,浸泡玻璃器具
    • 箱:洗涤完的玻璃器皿用烤箱烘干
    • 试验台试验台下面的柜子放置未消毒物品已消毒物品
    • 包装台:灭菌前的包装用。
     
    1. 配液室准备室2
    • 超纯水机
    • 高压锅:玻璃器皿、解剖用具、部分液体、塑料器具等灭菌
    • 天平(扭力天平和电子天平):称量用
    • pH
    • 磁力搅拌器
    • 恒温水浴锅
    1. 缓冲间(一更、二更)
    • 缓冲间内应有洗手盆,消毒液,无菌衣,帽,口罩,拖鞋等
    • 不应放置培养箱和其他杂物
    1. 无菌室
    1. 培养室
     
    • 实验室的经费预算
    • 实验室建设中的注意事项
    1准备室注意事项: 
    预防蒸馏器被烤干
    放置水池中的水渗出
    勿将酸液溅到衣物或地面
    勿将高压锅排气阀和安全阀堵塞
    已消毒物品应与未消毒物品分柜存放
    2培养室内要完全密闭,保持恒定的温度,要注意以下几点:
    培养室的位置*好设在阴面,阳光不能直接照射的地方,防止室内温度增高。
    天花板的高度不要超过2米,以保证紫外灯的有效杀菌效应,
    门一般用拉门,以防止空气流动。
    天花板、地板和四周墙壁要光滑无死角,要镶瓷砖或涂油漆,这样设计,一是便于清洗和消毒,另外也不易在墙角堆积灰尘。
    3使用超净工作台应注意的几点问题:
    • 净化工作台*好安装在无尘的房间内,*好为隔离好的无菌间内,以免尘土过多易使滤器阻塞,降低净化效果,缩短使用寿命。
    • 新安装的或长期未使用的工用台,工作前必须对工作台和周围环境用真空吸尘器或不产生纤维的工具进行清洁工作,再采用药物灭菌法或紫外线灭菌法进行灭菌处理。
    • 每次使用工作台时,应先用75%酒精擦洗台面,并提前以30~50min紫外线灭菌灯处理净化工作区内积累的微生物。在关闭紫外灯后应启动送风机使之运转两分钟后再进行培养操作。
    • 净化工作区内不应存放不必要的物品,以保持洁净气流型不受干扰。
    • 一般情况下,高效过滤器三年更换一次。更换高效滤器应请专业人员操作,以保持密封良好。要定期将粗过滤器中的过布(无纺布)拆下清洗,时间应根据环境洁净程度而定,通常间隔3~6个月进行一次。
    • 每次使用净化台要及时清除工作台面上的物品,并用洒精擦洗台面使之始终保持洁净。
    4、甲醛薰蒸:
    40%甲醛溶液(药用规格、福建三明化工总厂出品),用量30 ml/m3,室内温度21~24℃,相对湿度75%~85%,加热薰蒸使蒸汽弥漫全室,关闭门窗1 h。
    甲醛水溶液为无色,具有强烈刺激性气味的液体,可杀灭多数微生物,价廉,熏蒸消毒时不损坏衣服、家具、皮革、橡胶等。市售的甲醛水溶液中一般含37-40%的甲醛。其主要用法为:
    1.熏蒸消毒: 对室内消毒其用量为20-25%毫升/米,在加热该溶液时*好同时煮沸一壶水,使室内相对温度保持在70-90%左右,室内温度*好在20摄氏度以上,作用时间12-24小时。如消毒皮毛服装,甲醛水溶液的用量可加至125毫升/米,挂衣密度为每平方米3套为宜。熏蒸消毒时应密闭门窗。消毒后一般多用自然通风驱散甲醛气体,其需时较长,急于排出气体,可将25%氨水加热蒸发中和。氨水用量为所用甲醛水溶液的一半,中和时间为30分钟。
       2.自然挥发: 将较大量的甲醛水溶液放入一敞开容器中,室内温度保持在18摄氏度以上,同时室内喷水以保持相对湿度在70%以上,经16小时可达到室内消毒的目的。甲醛的毒性比甲醇大30倍。所以吃进4~10克甲醇,就能引起慢性中毒。它的毒性作用主要表现在损伤视力,使视力减退(不能矫正),视野缩小,以致双目失明,直到死亡。
     实际操作:
        每个房间7个平方,约20个立方。按书上的算要福尔马林300ml,高锰酸钾100g。高锰酸钾放入甲醛液体中后,在开始的3秒钟内没有反映,3秒钟以后,会产生大量烟气。所以一旦在甲醛中加了高锰酸钾请马上离开灭菌室,并关上门。高锰酸钾放入甲醛液体中会使液体沸腾,所以反应要在比较大的大口径容器进行,比如脸盆。甲醛气体毒性非常强,所以操作时一定要带上防毒面具。
     
    5、关于紫外线:
    不能照射紫外的物件可以用一般的材料盖住。如:玻璃和有机玻璃都可以的。紫外大型精密的显微镜是可以照的,因为它们的镜头上涂的膜会不会被分解掉,经询问了解是没有关系的。紫外线的穿透能力非常弱的,主要靠电离产生氧自由基来消毒。细胞培养室里面一些
    如果细胞培养间有层流系统,那紫外的作用是可以被忽略的,但如果没有层流系统,那么紫外的作用还是相当重要。紫外的照射会产生臭氧,臭氧过量吸入的作用应该和双氧水的作用是一样的,有一定的致癌性。所以紫外灭菌以后,*好过一个小时再进去。 
    6、关于新洁尔灭: 
    苯扎溴铵溶液 (新洁而灭溶液) 500毫升﹕25克;无色或淡黄色的澄明液体;芳香;味极苦;强力振摇能发生多量泡沫,遇低温可能发生浑浊或沉淀可置于温水中加温,振摇使溶解后使用。它是一种阳离子表面活性剂类广谱杀菌剂它可外用消毒防腐药,不可内服不得用塑料或铝制容器贮存避光,密封保存粘着部位如有灼烧感、瘙痒、红肿等洗净必要时向医师咨询。不得与肥皂或其他合成洗涤剂并用局部消毒时勿与碘酊、高锰酸钾、双氧水、磺胺粉等并用。
    在甲醛灭菌前,先用新洁尔来擦洗整个墙面,此外,平时地板灭菌也可以用它。新洁尔灭*大的优点是便宜,因为新洁尔灭500ml只需5元,而且可以稀释50倍用,而同样量的酒精价格可能是新洁尔灭的几十倍。
     
    上一篇:没有了下一篇:负压隔离室顺利验收并投入使用
北京百洁伟业净化技术有限公司
联系人:温经理  联系电话:13718869113  传真:
联系地址:北京通州区马驹桥镇景盛中街13号

技术支持:谷瀑环保     免责申明     京ICP备14054284号